我的236 幻灯片 股票 考研 快速修复电脑 流行 我的236---i236.com
人物 美食 生物实验 科普

真核基因组DNA的快速提取(CTAB法)

作者:    来源:

 
一、教学基本要求
1、 学习高等真核生物基因组DNA的快速提取方法。
2、 了解真核基因组DNA的有关特性。
二、教学内容
〖实验目的〗
      掌握真核基因组DNA的快速提取方法。

〖实验原理〗 
      CTAB是一种非离子去污剂。CTAB 与核酸形成复合物, 此复合物在高盐 (>0.7mM) 浓度下可溶, 并稳定存在, 但在低盐浓度 (0.1-0.5 mM NaCl)下 CTAB-核酸复合物就因浓度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经离心弃上清后,CTAB-核酸复合物再用 75%酒精浸泡可洗脱掉CTAB。
〖实验材料〗
水稻或其它植物材料
〖仪器及药品〗
冷冻离心机、高速离心机、分光光度计
〖实验步骤〗
1.在2mL离心管中,加入500μl的2×CTAB和20 μlβ-巯基乙醇, 65℃预热。
2.嫩的组织材料1-2g,用蒸馏水冲洗干净,再用灭菌ddH2O冲洗2次,放入经液氮预冷的研钵中,加入液氮研磨至粉末状,用干净的灭菌不锈钢勺转移粉末到预热的离心管中,总体积达到1mL混匀后置65℃水浴中保温45-60min,并不时轻轻转动试管。
3.加等体积的氯仿/异戊醇,轻轻地颠倒混匀,室温下10000rpm离心10 min,移上清至另一新管中。
4.向管中加入1/100体积的RNase A溶液,置37℃20-30min。
5.加入2倍体积的100%乙醇或0.7倍体积异丙醇,会出现絮状沉淀,-20℃放置30 min或-80℃放置10min,12 000rpm离心10-15min回收DNA沉淀。
6.用70%乙醇清洗沉淀两次,吹干后溶于适量的灭菌ddH2O中。
7.0.8%琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA的完整性。
〖注意事项〗
  冻存材料直接研磨,绝对不能化冻。而且粉末应在化冻前转移否则内源性Dnase有可能降解基因组DNA。


@2009-i236.com,contact us by i236@i236.com