原理：

生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α- 氨基酸的α-氨基与α-酮酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解，尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类甚多，其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）和谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的活力最强。它们催化的反应如下。

正常人血清中只含有少量转氨酶。当发生肝炎、心肌梗死等病患时，血清中转氨酶活力常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。
测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分光光度法。谷丙转氨酶作用于丙氨酸和α-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4- 二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。

丙酮酸2，4- 二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，可用分光光度法测定。从丙酮酸2，4- 二硝基苯腙的生成量，可以计算酶的活力。

试剂：

1.0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）

2.2μmol/L 丙酮酸钠标准液（取分析纯丙酮酸钠11mg溶解于50 mL磷酸缓冲液内（当日配制）。
3．谷丙转氨酶底物 150 mL
取分析纯α- 酮戊二酸29.2mg，DL-丙氨酸1.78g置于小烧杯内，加1mol／L氢氧化钠溶液约10mL使完全溶解。用1mol／L氢氧化钠溶液或1mol／L盐酸调整pH至7.4后，加磷酸缓冲液至100 mL。然后加氯仿数滴防腐。此溶液每mL含α-酮戊二酸2.0μmol，丙氨酸200μmol。在冰箱内可保存一周。
4．2，4- 二硝基苯肼溶液 150 mL
在200 mL锥形瓶内放入分析纯2，4-二硝基苯肼19.8 mg，加100mL1 mol／L盐酸。把锥形瓶放在暗处并不 时摇动，待2，4- 二硝基苯肼全部溶解后，滤入棕色玻璃瓶 内，置冰箱内保存。

5.0.4mol/L NaOH

6.人血清

步骤：

1．标准曲线的绘制 取6支试管，分别标上0，1，2，3，4，5六个号。按下表所列的次序添加各试剂。

 2，4-二硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙。底物中的α- 酮戊二酸与2，4-二硝基苯肼反应，生成α-酮戊二酸苯腙。因此，在制作标准曲线时，须加入一定量的底物（内含α- 酮戊二酸）以抵消由α-酮戊二酸产生的消光影响。
先将试管置于37℃恒温水浴中保温10分钟以平衡内外温度。向各管内加入0.5 mL 2，4- 二硝基苯肼溶液后再保温20分钟，最后，分别向各管内加入0.4 mol／L氢氧化钠溶液5 mL。在室温下静置30分钟，以0号管作空白，测定A520nm的吸光度。用丙酮酸的μmol数为横坐标，光吸收值为 纵坐标，画出标准曲线。
2．酶活力的测定 取2支试管并标号，用第1号试管做为未知管，第2号试管做为空白对照管。各加入谷丙转氨酶底物0.5 mL，置于37℃水浴内10分钟，使管内外温度平衡。取血清0.1mL加入第1号试管内，继续保温60分钟。到60分钟时，向2支试管内各加入2，4- 二硝基苯肼试剂0.5 mL，向第2号试管中补加0.1mL血清，再向 1、2号试管内各加入0.4 mol／L氢氧化钠溶液5 mL。在室温下静置30分钟后，测定未知管的A520nm波长光吸收值（显色后30分钟至2小时内其色度稳定）。在标准曲线上查出丙酮酸的μmol数（用1μmol丙酮酸代表1.0单位酶活力），计算每100 mL血清中转氨酶的活力单位数。