【原    理】

从全血制备白细胞DNA，可用双蒸水溶涨红细胞及白细胞膜，释放出血红蛋白及细胞核，使核酸处于易提取状态，加NaI破核膜并使DNA从核蛋白中解离，用氯仿/异戊醇抽提使蛋白质沉淀完全（异戊醇去泡沫），DNA存在于上层水相中，以37%异丙醇沉淀DNA，离心弃去异丙醇，并重复操作一次，即可获得白细胞DNA。用NaI法提取白细胞中的DNA可用于Southern杂交、PCR等。

【试剂及配制】

1、6mol/LNaI

配制：0.75gNa₂SO₃溶于40ml ddH₂O加45gNaI，并搅拌至完全溶解（约30min），用Whatman滤纸过滤，避光保存可达3~4个月。

2、氯仿/异戊醇（24:1V/V）混合液，应装密封瓶中保存。

3、异丙醇（isopropanol）（AR）

4、37%异丙醇

5、双蒸水（ddH₂O）（高压灭菌）

6、1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）（pH8.0）

称取121.14克Tris溶于800ml双蒸水中，并加浓HCl约42ml，使溶液冷至室温，调正pH至8.0后，定容至1L，分装，高压灭菌。

7、0.5mol/L乙二胺四乙酸钠盐（EDTA-Na₂）（pH8.0）

称取186.10克EDTA-Na₂·2H₂O溶于800ml水中，用NaOH调至pH8.0后，定容至1L，分装，高压灭菌。

8、TE缓冲液（pH8.0）（10mol/L   Tris-Cl、2mmol/L  EDTA）

取上述试剂6（1mol/L   Tris）10ml，试剂7（0.5mol/L  EDTA）2ml加双蒸水至1L混匀，高压灭菌。

【操作步骤】

1、取新鲜抗凝血100μl置Eppendorf（Ep）管中，离心10000rpm×1min。

2、弃上清，加ddH₂O  200μl，摇匀20sec。

3、加6mol/L  NaI  200μl，缓慢倒置摇匀20sec。

4、于管内加氯仿/异戊醇（24：1）400μl，摇匀20sec，离心12000rpm×12min

5、吸取上层水相360μl置一新Ep管中，加纯异丙醇200μl，摇匀20sec

6、室温放置15min，离心14000rpm×12min

7、小心弃去上清，再加37%异丙醇1ml（勿摇动），离心14000rpm×12min

8、小心弃去异丙醇，晾干。

9、加50μl  TE缓冲液溶解DNA，以琼脂糖凝胶电泳鉴定或-20℃保存。

【注意事项】

1、标本必须新鲜，提取前细胞应保持完整。所用Ep管，吸嘴等器物及ddH₂O、试剂等应高压灭菌，操作尽量在4℃以下进行。

2、混匀试剂、吸取上清等操作时应避免动作剧烈。

3、弃异丙醇时动作应轻，切忌甩干，以免DNA丢失。

4、0.54~1倍的异丙醇可选择性沉淀DNA和大分子rRNA和mRNA、rRNA及多糖不产生沉淀。一般不需在低温条件下放置。其缺点是易使盐类与DNA共沉淀；在DNA沉淀中的异丙醇难以挥发除去，所以常规需要70%的乙醇漂洗DNA沉淀物。