【原　理】

用三氯醋酸沉淀血清之蛋白质，于其无蛋白滤液中加入钼酸试剂后，与血清的无机磷结合生成磷钼酸，再用氯化亚锡将磷钼酸还原成蓝色的钼蓝，其蓝色之深浅与血清无机磷的含量成正比。与同样处理的磷标准溶液比色后，通过计算即求出血清无机磷的含量。

【试　剂】

1、10%三氯醋酸。

2、磷标准溶液（每毫升0.8微克）。

3、钼酸试剂。

4、氯化亚锡溶液。

【操　作】

1、取小三角瓶一个，加入血清0.2ml，10%三氯醋酸9.8ml，混合后，静置5分钟，过滤，将滤液保留一试管中备用。

      2、取三支试管，标明1、2、3号，按前表操作。

3、将各管摇匀后，于室温中静置10分钟，以1号管内溶液作空白，在660nm波长进行比色，记录2、3号管内溶液的吸光度读数分别为A_标、A_样。

每100毫升血清中无机磷的含量（毫克）

正常血清无机磷的含量为3~5毫克/100ml。在甲状旁腺机能减退、维生素D缺乏病时，血清无机磷的含量可降低。在肾功能不全时，可以使血清无机磷的含量升高。故临床上测定血清无机磷含量，有助于有关疾病的诊断。

【试剂配法】

1、钼酸试剂：称取5克钼酸铵，溶于10毫升蒸馏水内，再加15毫升浓硫酸，待冷却后，加蒸馏水至100毫升。

2、氯化亚锡溶液：称取2克氯化亚锡溶于5毫升浓盐酸中，保存于棕色瓶内，贮冰箱，此液称为氯化亚锡原液。在每次实验前，取该溶液0.5毫升，用蒸馏水稀释至100毫升。该液贮于冰箱，但只能应用2~3天。

3、无机磷标准液：（1毫升=0.8微克）称取2.194克纯KH2PO4溶于已盛有约100毫升蒸馏水的500毫升的量瓶中，加入10毫升5mol/L硫酸，摇匀，再用蒸馏水稀释至刻度，反复倒转几次摇匀。此液为标准无机磷贮存液，每毫升含磷1毫克。向标准无机磷贮存液中加入氯仿10毫升，用力振荡，使氯仿在贮存液中饱和，如此可防止因细菌的生长而使标准磷的含量下降，取该贮存液0.8毫升用蒸馏水稀释至1000毫升，即配成每毫升含磷0.8微克的标准应用液。

【注意事项】

1、血液样品必须新鲜，不能有溶血现象，否则，血球内大量的有机磷进入血清，影响结果，如血液样品久置不分离，血球之中有机磷经酶的作用可变为无机磷，然后通过红血球膜进入血清中，也会导致测定结果过高。

2、用三氯醋酸沉淀蛋白质，滤液呈较强酸性，使磷酸盐不致沉淀，并抑制有机磷化合物的分解。

3、滤纸应先用稀盐酸洗涤，否则滤纸上的磷影响测定结果。

4、氯化亚锡有还原作用（本身不稳定，易被氧化），实验时须临时配制应用液。