原理
切片,是把包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带。
贴片,是用粘贴剂把切片平铺贴在载玻片上,以便于染色。
试剂与器材
1.试剂:Haupt’s明胶粘片剂。
2.器材:切片机、切片刀、单面刀片、酒精灯、蜡铲、台木、毛笔、蜡带盘、载玻片、 镊子、滴瓶、展片台。
步骤
一、切片
1. 切片前的准备工作
(1)石蜡块的固着:先将蜡块用刀片切成方形或长方形,组织四周留下2-3mm宽的石蜡。点燃酒精灯,然后用烤热的蜡铲放在台木和蜡块之间,利用蜡铲的温度熔化两者的蜡,把蜡块粘附在台木上。
(2)整修:用单面刀片将蜡块四周修整平行。
2.切片机
切片机的式样很多,一般常用的为轮转式切片机,这种切片机的夹物部分是上下移动,前后推进的,而夹刀部分则固定不动。通过调整控制刀片厚度的微动装置就可以切出不同厚度的连续切片。
3.切片的方法
(1)将已固定和修好的石蜡块台木装在切片机的夹物台上。
(2)将护刀盖推至打开位置。
(3)摇动快速进退手轮,使石蜡块与刀口贴近,但不超过刀口。(在转动手轮时,应保证机头在红、绿线之间移动。)
(4)调整石蜡块与刀口之间的角度与位置,刀片与石蜡切片约成15-30度。
(5)调整厚度调节器到所需的切片厚度,一般4-10微米。
(6)一切调整好后就可以切片。此时右手摇动大手轮,左手持毛笔将蜡带提起,摇转速度以每分钟40-50转为宜。
(7)切成的蜡带到20-30厘米时,右手用另一支毛笔将蜡带挑起,平放在蜡带盘上(靠刀面较光滑的一面朝下)。
二、贴片
1.取一清洁的载玻片,滴一小滴粘片剂于玻片中央,用手指涂抹均匀。
2.滴1-2滴蒸馏水于已涂粘片剂的载玻片上。
3.用刀片割一小段蜡带,放在水面上。注意蜡片光面贴于玻片上。并使之偏玻片的一端,另一端贴标签。
4.把玻片标本置于展片台上(温度保持在40-45ºC), 直到蜡片伸展摊平。
5.展片后把玻片标本编好记号,放在平盘上。