一、目的

了解黑曲霉的形态特征，学习并掌握好气性菌种的筛选方法。

二、原理

摇瓶培养是实验室常用的通风培养方法，通过将装有液体培养物的三角瓶放在摇床上振荡培养，以满足生物生长、繁殖及产生许多代谢产物对氧的需求。它是实验室筛选好气性菌种及摸索工艺条件的常用方法。

葡萄糖淀粉酶（EC3.2.1.3）系统名为淀粉α-1,4-葡聚糖葡萄糖水解酶，俗称糖化酶，是国内产量最大的酶品种。糖化酶对淀粉分子的作用是从非还原性末端切开α-1,4键，也能切开α-1,3键和α-1,6键，产生葡萄糖。

黑曲霉AS3.4309是我国生产糖化酶常用的菌种，在查氏平板上的形态特征是：菌落生长呈扩散形，菌丝白色，有时出现黄色区域，绒状，有明显的辐射波纹，无渗出液，边缘生长较薄，咖啡色，反面为淡黄色。形态特征是否正常直接影响酶的产生。

三、材料

1、菌种：黑曲霉（Aspergillus niger）As3.4309。

2、工具：三角瓶　无菌水　摇床

四、方法与步骤

取6只500ml三角瓶，分别安装液量100ml、200ml、300ml配制培养基（玉米粉6％，豆饼粉2％，麸皮1％），加水后稍微摇动，使原料湿润，浸入水中。用8层纱布包扎瓶口，再加牛皮纸包扎。置灭菌锅中，在0.1MPa下灭菌30min。

将成熟的斜面，在无菌条件下，注入10ml无菌水，振荡成孢子悬浮液。待发酵培养基灭菌后冷却到30～32℃时，分别将孢子悬浮液接入三角瓶中，接种量为2ml，每个菌种各接3只，标好记号。

将三角瓶固定在摇床上，培养温度为31℃，转速为200r/min，培养时间96h。显微镜观察菌丝形态，用试纸测发酵液pH，测定酶活力。摇瓶培养时观察摇瓶机的结构。

五、实验结果

比较两种不同菌的菌体形态特征、酶活力，记录结果。