
原理:细胞骨架(cytoskeleton),是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构,根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时,可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉,但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来,后者用考马斯亮蓝R250 染色,在光学显微镜下可见一种网状结构。
试剂:
1、M-缓冲液:50mmol/L (PH 6.7)咪唑、 50 mmol/LKCl 、 0.5 mmol/LMgC12 、1 mmol/L EGTA 、0.1 mmol/L EDTA 、 1mmol/L巯基乙醇、 4mmol/L甘油 、1 mmol/L HCl 调pH 至7.2。
2、pH6.8磷酸缓冲液;
3、1% TritonX-100,用M-缓冲液配制;
4、0.2%考马斯亮兰R250;
5、3%戊二醛,用pH6.8磷酸缓冲液;
步骤:
1.撕取洋葱鳞茎内表皮细胞(约1cm2大小若干片)置于装有pH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中,使其下沉;
2.吸去pH6.8磷酸缓冲液,用1% TritonX-100处理20min;
3.吸去1% TritonX-100,用M-缓冲液洗三次,每次8min;
4.3%戊二醛固定30min;
5.pH6.8磷酸缓冲液洗三次,每次8min;
6.0.2%考马斯亮兰R250染色20min;
7.用蒸馏水洗1-2次,将内表皮细胞平铺子载玻片上,加盖玻片,于显微镜下观察。